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1878 人阅读发布时间:2025-03-03 15:22
细胞组分分离(cell fractionation )是指把细胞的各种细胞器或不同组成成分分离的过程。
哪些研究和应用需要进行组分分离?你的文章需不需要加一组组分分离实验?我们来看几篇SCI一起总结!
1
富集低丰度蛋白

Kashiwagi Y等人研究缺血再灌注对SGLT1跨膜蛋白表达水平有无影响时,使用离心管柱法对灌注后小鼠心脏样品进行组分分离,分别使用总膜(细胞器膜+质膜)(图A)和质膜部分(图C)进行WB检测,与总膜部分相比,质膜蛋白富集后SGLT1和质膜蛋白内参Na+/K+ ATPase信号在质膜蛋白组分中都有显著的增强。
Kashiwagi Y, Nagoshi T, Yoshino T, Tanaka TD, Ito K, Harada T, et al. (2015) Expression of SGLT1 in Human Hearts and Impairment of Cardiac Glucose Uptake by Phlorizin during Ischemia- Reperfusion Injury in Mice. PLoS ONE 10(6):e0130605. doi:10.1371/journal.pone.0130605.
提示说明:部分蛋白(大部分质膜蛋白)为低丰度表达,没有经过分离和富集时很难检测和定量。通过组分分离可有效富集低丰度蛋白,降低下游检测难度,使你的结果更显而易见!
2
检测靶蛋白分布

Georgiou等人研究钙离子通道复合物Cav1.1调控脂肪酸转运蛋白CD36分布和脂肪酸代谢。 Cav1.1 E1014K基因敲除小鼠(EK)和野生小鼠(WT)的肌肉组织样品,使用离心管柱法进行细胞组分分离,分离后的细胞浆,细胞核,细胞膜以及线粒体组份进行Western印迹,检测CD36的表达及分布情况。 Lamin A, GAPDH, 及VDAC 分别为细胞核,细胞浆及线粒体组份的内参。结果表明,与WT相比,EK小鼠的CD36在细胞浆组分中增加,在质膜组份中减少。其它膜蛋白(eNOS,Cav1.1,RyR1)则无明显变化。
Georgiou D. K., et al. (2015). Ca2+ Binding/Permeation via Calcium Channel, CaV1.1, Regulates the Intracellular Distribution of the Fatty Acid Transport Protein, CD36, and Fatty Acid Metabolism doi: 10.1074/jbc.M115.643544 jbc.M115.643544.
提示说明:研究目标蛋白的分布和变化情况时,可对同一样品进行组分分离,抽提和富集不同细胞组分蛋白,分别检测目标蛋白特征,让文章更加详细。
3
蛋白定位研究

Jing Liu, Wensu Liu, Jun Zhang, Fuchou Tang,Xiaoqun Wang et al.(2017).The Primate-Specific Gene TMEM14B Marks Outer Radial Glia Cells and Promotes Cortical Expansion and Folding. Cell Stem Cell (2017), doi.org/10.1016/j.stem.2017.08.013
提示说明:当目标蛋白在某些条件下发生转位时,可以进行细胞组分分离后,对其进行追踪定位研究。
4
蛋白转运研究

Leung等人研究PRL3对ULBP2蛋白转运的影响。人结肠癌细胞系HCT116使用40uM PRL3-I处理,使用离心管柱法进行细胞组分分离,分别对细胞质膜,细胞器和细胞浆组分进行WB检测,结果显示,经过PRL3-I处理后抑制了ULBP2的成熟,导致ULBP2蛋白在内质网中的滞留,而无法转运到细胞质膜上。
Leung W-H. et al.(2015). PRL-3 Mediates the protein Maturation of ULBP2 by regulating the tyrosine phosphorylation of HSP60.The Journal of Immunology.doi:10.4049/jimmunol.1400817.
提示说明:当研究目标蛋白是否在某些条件或某种处理之后,会发生蛋白转运改变,可进行细胞组分分离,分别使用不同组分进行目标蛋白的检测,可以追踪蛋白转运过程的每一个环节,让文章的故事情节更完整
小结
如下研究及应用需进行细胞组分分离
1.低丰度蛋白富集
2.检测靶标蛋白在细胞组分中分布情况
3.蛋白定位研究
4.蛋白转运研究
以上案例中涉及细胞组分分离实验,均使用了Invent公司柱式法细胞组分分离试剂盒(Invent Cat# SM-005)进行组分分离。本试剂盒可在1小时内,完成细胞核,细胞浆,细胞器,细胞质膜的分离。
SM-005 Minute TM 动物质膜蛋白和细胞组分分离试剂盒
操作时间:仅需1小时。
设备需求:台式离心机(Max speed 16000xg),无需超高速离心。
样品:细胞及组织样品通用。
可分离组分:一次可获得细胞核,细胞浆,总膜,细胞器,质膜组分。
下游实验:提取过程中不含表面活性剂及EDTA,可兼容各类下游实验,WB,IP,Co-IP,ELISA,酶活性检测等。
可获得一致性和重复性良好的结果。
近百篇高分SCI文献支持。

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