WB内参条带调不齐是怎么回事？

提取的蛋白样品我们会默认其具有与体内真实情况相同的蛋白图谱和正确的蛋白比例，然而蛋白样品是否被完全提取了呢？内参蛋白会完全被提出吗？整个过程会不会有丢失呢？从下图中我们不难得出结论，这么多种不同的常用内参，居然在提取蛋白的过程中都会有丢失，不同内参丢失的量也不相同，他们存在于不可溶组分中被扔掉，所以每次内参参差不齐，似乎永远没答案！

这个问题有点不寒而栗，同样的样品检测不同内参会有不同量的丢失。也就是说提取过程中蛋白丢失是随机的，且并非等比例丢失，不同样品之间的差异恐怕更加不可估计。所以，要想调齐内参，首先要确定自己提取到的是全部的蛋白，这样才能让WB结果真实可信！

柱式法蛋白提取（Invent，Cat# SD-001/SN-002）解决内参丢失方案戳着这里：

WB半定量内参有丢失，你却一直不知道？

蛋白提取后，你有没有进行蛋白定量，也就是大家说的测浓度呢？据悉有很多小主每次提取蛋白后不定量，只是估摸着上样。每次的样品起始量及加入的裂解液量不同，即使是同一样品，得率和浓度会有很大不同，所以估算着上样会导致上样量差别巨大。

建议大家一定要先进行蛋白定量，然后将蛋白浓度都稀释调整到某一固定浓度，等体积等质量上样。还可以在转膜后使用丽春红染液（Invent，Cat#WA-004）来进行转膜效率及上样量的检验。（PS：不论用什么方法进行蛋白定量，都会存在误差，如果定量后上样仍有一些条带差异，可以按照条带强度来调整上样量。）

如何使用丽春红染色

除以上几点外，还要考虑是否存在以下问题

1. 跑胶时电流或电压是否太大

2. PAGE胶的制备是否正确

3. 转膜效率是否一致