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WB目标蛋白就在Cell lysate与Total protein的差别之间!进来帮你找到它!

8193 人阅读发布时间:2021-02-08 10:40

做WB最头疼的事情是什么?背景黑一点点忍一忍,条带歪点丑点也能勉强交差,唯独内参做的好好的,却没有目的条带这件事最让人抓狂!这种目标蛋白“藏猫猫”的事情,并非偶发,经过大量研究验证和反馈,罪魁祸首居然是因为蛋白样品不行!

Cell lysate是否等于Total protein?蛋白样品制备虽然简单,但是内含的“玄学”又不少,不同的裂解液,不同的样品破碎方式,不同的提取方法所得到的蛋白样品蛋白谱差别很大。(WB样品制备大揭秘,不同裂解液,不同方法结果报告出炉!)Total是全部蛋白,而cell lysate则要经过离心去除沉淀取上清才能进行实验,也许让你头疼不已整日寻找的目标蛋白,就在这团沉淀中,在提取过程中被扔掉了!扔掉的沉淀中已经被研究者证实存在蛋白(下图1,2),且可能根据样品不同,起始量不同,操作不同而扔掉的蛋白种类有所不同。Cell lysate并不等于Total protein!很可能一不小心WB就败在了第一步上。

WB目标蛋白就在Cell lysate与Total protein的差别之间!进来帮你找到它!
BioTechniques 61:327 (December 2016)

 

WB目标蛋白就在Cell lysate与Total protein的差别之间!进来帮你找到它!

Kevin A. Janes,2017,Sci Signal. ; 8(371): rs2. doi:10.1126/scisignal.2005966.

 

如果你正在经历内参很好目的蛋白就是没有的情况,不妨先思考以下几个问题:

1.目标蛋白在细胞内的定位

如果目标蛋白定位于胞浆中,请跳转第2个问题是否因为表达量过低没有检测出。如目标蛋白定位于胞核内,各类细胞器或者是细胞膜上,很可能是因为提取方法对不可溶组分提取效率低,从而无法有效获取目标蛋白,需要更换提取方式。

 

2.目标蛋白的表达量高低

如果目标蛋白表达量较低,可选择增加上样量检测,如增加后仍然难以检测,则建议对目标蛋白所在的位置单独进行分离,以达到富集目标蛋白的效果。

 

3.提取蛋白过程中是否产生了不可溶组分

如果提取蛋白的过程中产生了不可溶组分,即肉眼可见的沉淀团,这部分沉淀除了核酸残团外经研究还包括了许多蛋白质,说不定你的目标蛋白就在这个神秘的沉淀中,一定要关注!

 

目前使用的裂解液法(如RIPA等)提取得到的蛋白都是Cell lysate,是去除了部分蛋白的样品,而非真正意义上的Total protein。而实验本意是需要使用Total protein验证,如何获取真正意义的Total Protein?Invent柱式法总蛋白提取试剂盒采用离心管柱和优化的裂解液配方,更有效的增加蛋白质的溶解度,特别是对不可溶组分的增溶效果显著,不产生不可溶组分,离心管柱有效去除样品中的核酸,1分钟即可获取适用于WB的Total Protein,帮你找回扔掉的目标蛋白。细胞,组织样品通用,百余篇SCI数据支持,数百种样品及抗体指标验证了柱式法的可靠性及稳定性。

 

目前已经验证的样品如下:

WB目标蛋白就在Cell lysate与Total protein的差别之间!进来帮你找到它!

 

WB目标蛋白就在Cell lysate与Total protein的差别之间!进来帮你找到它!

 

如果你的目标蛋白还在与你“藏猫猫”,如果想查询你的目标蛋白是否可以用柱式法帮你找回,与我们交流吧!

010-58207790

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