WB条带若隐若现，一定要这样做！

😫 做WB你是不是也这样崩溃过？
 “Marker齐整、内参漂亮，目标条带却「若隐若现」。”

“上样量加到50μg，目标条带还是没变粗，背景却糊成雾。“
 “抗体浓度翻倍，信号没涨，杂带先开花。”

遇到这样的情况，大概率目标蛋白是“低丰度”蛋白。

低丰度蛋白（Low-Abundance Protein, LAP）——只占细胞总蛋白的0.1%~3%，却是疾病标志物、药靶、磷酸化、泛素化、乙酰化事件的“主咖”。

例如：肿瘤早筛标志物（如IL-37、GDF-15），信号通路关键节点（如p-STAT3、NF-κB、p52），药物靶点（如SGLT1、Claudin-18.2）等。

我们将10 年LAP实战经验浓缩成4个方案，让信号迅速提升，背景降一半。
 不挑仪器，不挑样本，今天就能用——

① 「增溶」：让蛋白从沉淀里「走出来」

痛点
RIPA 裂解液是蛋白提取的常用试剂，却拿膜蛋白、核蛋白等难溶蛋白没办法——30% 以上蛋白跟着「白色沉淀」被扔掉。

Fig1.RIPA不同强度裂解液均产生不可溶性组分（白色沉淀）

Fig2.柱式法总蛋白提取和RIPA裂解液提取效果比较

实测数据（中科院健康所）

自配裂解液，RIPA裂解液，Invent柱式法蛋白提取试剂盒 × GIST肿瘤细胞

Fig3.不同蛋白提取方法检测结果比较

KDM5A（组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A），在正常细胞中，KDM5A表达水平通常较低。但在多种癌症中呈现异常高表达，如肠癌、黑色素瘤等模型中，是检测肿瘤发生发展密切相关指标。H3K4me3是组蛋白，位于细胞核内，KDM5A通过调控H3K4me2/3去甲基化参与基因转录抑制。常规裂解液对KDM5A和H3K4me3的提取效率较低，检出的条带若隐若现，使用Invent柱式法总蛋白提取试剂盒（Cat#SD-001/SN-002），内参GAPDH统一，两个目标蛋白信号提升多倍，说明柱式法总蛋白提取方法可有效增溶目标蛋白。

② 「富集」：把目标细胞器「搬出来」单独跑

痛点
总蛋白里LAP占比过低，被高丰度蛋白「淹没」，上样50μg仍然检测不到。

方案
当目标蛋白在总蛋白中占比过低时，可根据目标蛋白的定位，进行亚细胞结构富集，从而增加检出效率。

Invent柱式法亚细胞结构分离系列工具（可分离质膜/核/线粒体/内质网/高尔基/溶酶体/内体/叶绿体等重要亚细胞结构）

• 无需超速离心，不依赖超离经验

• 1小时左右即可富集高纯度亚细胞结构

实测数据（东京慈恵会医科大学）

Invent柱式法亚细胞结构分离试剂盒 ×灌注小鼠心脏

Fig5.质膜富集后目标蛋白信号明显提升

跨膜蛋白 SGLT1（~75 kDa），Na+/K+ ATPase（~113 kDa）属于难溶且低表达的膜蛋白，使用总蛋白样品或总膜蛋白检测SGLT1和Na+/K+ ATPase条带隐约不可见，使用Invent 动物质膜/蛋白和细胞组分分离试剂盒（Cat SM-005）将质膜组分富集后检测，可见目标条带清晰，条带锐利，背景干净，信噪比高。说明使用Invent柱式法亚细胞结构分离工具，可以有效富集亚细胞结构，提升目标检测信号强度。

③ 加「增强剂」：让抗体「多抓 3 倍蛋白」

痛点
 抗体加量 → 背景先爆，信号仍弱。

方案
 使用抗体增强剂（Antibody Enhancer）

• 增加蛋白和抗体的结合效率，有效增加抗体的灵敏度，提高检出率

• 封闭非特异位点，背景大幅度降低

   

实测数据

④ 「去高丰度」：把「噪音」直接踢掉

痛点
血清血浆中白蛋白、植物中Rubisco占总量 50–80%，遮蔽 LAP。

方案
 高丰度蛋白去除剂

• 白蛋白去除率 > 95%

• Rubisco 去除率 > 85%

• 兼容质谱/WB检测

实测数据

血清和血浆样品使用Invent白蛋白去除试剂（Cat WA-013）去除白蛋白后，低丰度蛋白条带检测明显富集（条带2）

Fig7.使用白蛋白去除剂后SDS-PAGE中条带变化

植物样品使用Invent植物Rubisco去除试剂盒（Cat RD-046）去除Rubisco，低丰度蛋白条带检测明显富集（条带2，3，5，6，7，9）。

Fig8.使用Rubisco去除剂后SDS-PAGE中条带变化

遇到目标条带若隐若现，不要慌，增溶 → 富集 → 增强 → 去高4 招可叠加，也可单用，平均节省 60% 抗体、50% 时间，信号提升 5–50 倍。