【收藏】细胞器蛋白定位，你需要这些 Marker！

做 WB 验证蛋白定位时，总有小伙伴困惑，我的实验到底需要用什么作为内参呢？是用管家基因就可以还是需要特定组分的 Marker 呢？这里 Invent 提示大家，只要 WB 验证的问题涉及到蛋白的位置，都需要使用组分特有的 Marker。例如做蛋白转运，移位，定位实验，不同组分间蛋白表达量对比实验，以及检测分离组分间交叉污染情况！

案例分享：



Kong, P 等人在研究 circ-Sirt1 抑制 NF-kB 核转位的机制及在血管炎症中的意义时，首先将血管平滑肌细胞胞浆和胞核蛋白分离（Invent Cat# SC-003），通过 WB 验证，过表达 circ-Sirt1 明显抑制了 TNF-α 诱导 NF-kB p65 核转位激活，敲低 circ-Sirt1 显著增强了 TNF-α 诱导 NF-kB p65 核转位激活。在此对比中，分别使用了 GAPDH 作为胞浆内参，Lamin A/C 作为细胞核内参。



山东大学附属生殖医院卵巢早衰课题组通过对一名原发性卵巢功能不全（POI）中国女性患者及家庭成员进行研究，发现了一种新的纯合子 FSHR 基因突变，FSHR p.R59X 突变体通过阻止卵泡发育而引起原发性卵巢功能不全。分离 293 细胞的质膜组分（Invent Cat#SM-005），使用质膜 Na/k ATPase 内参，验证 7 次跨膜蛋白 FSHR 表达情况。



Vazquez-Medina J.P. 等人研究 LPAR 阻断降低激动剂诱导的 RAC1 转位到 PMVECs 的质膜的实验中。将细胞器和细胞质膜分离后（Invent Cat#SM-005），WB 检测 Na+/K+-ATPase 和 flotillin 检测质膜的富集情况，并检测了线粒体、高尔基体和内质网内参与质膜无交叉污染。PM，质膜；TM，总膜；OM，细胞器膜。



小鼠的肝脏组织分离出高尔基组分（Invent Cat#GO-037），使用 Golgi 的 Marker 作为高尔基分离效率的检测，并同时检测质膜内参（Na/K ATPase）, 线粒体，GAPDH 内参，来确认交叉污染情况。

案例看完后，需要各个细胞组分的 Marker 怎么办？Invent 为您贴心的总结和整理好了动植物各个细胞组分内参的列表，请笑纳！





这样就完了吗？当然不是，Invent 作为柱式法蛋白提取和亚细胞结构分离的平台，除了可以从各类样品中快速提取总蛋白，还为大家提供了一些列亚细胞结构分离方案，可分离细胞核，核基质，核膜，内质网，高尔基体，溶酶体，蛋白酶体，内体，外泌体，线粒体，质膜，叶绿体，微粒体。亚细胞结构想分哪里就分哪里，老师再也不用担心我的课题了！有了 Invent，「马上有条带」！