跨膜蛋白提取无从下手？1小时完成不是梦想！

质膜蛋白表达丰度低，约占总蛋白的 10%，即使过表达的目标蛋白质也经常会出现表达量较低或者无活性的情况，质膜蛋白提取和分离十分困难，特别是跨膜蛋白更是难上加难，所以进行各类下游检测经常受阻。

为什么要提取膜蛋白？

根据蛋白分离的难易及在膜中分布的位置, 膜蛋白基本可分为两大类：外在膜蛋白（peripheral）和内在膜蛋白（integral）。

外在膜蛋白：约占膜蛋白的 20％～30％, 分布在膜的内外表面, 主要在内表面, 为水溶性蛋白, 它通过离子键、氢键与膜脂分子的极性头部相结合, 或通过与内在蛋白的相互作用, 间接与膜结合。

内膜在蛋白：约占膜蛋白的 70％～80％, 是双亲媒性分子, 可不同程度的嵌入脂双层分子中。有的贯穿整个脂双层, 两端暴露于膜的内外表面, 这种类型的膜蛋白又称跨膜蛋白。内在膜蛋白露出膜外的部分含较多的极性氨基酸, 属亲水性, 与磷脂分子的亲水头部邻近；嵌入脂双层内部的膜蛋白由一些非极性的氨基酸组成, 与脂质分子的疏水尾部相互结合, 因此与膜结合非常紧密。例如：通道蛋白质、载体蛋白质、受体蛋白质等都是跨膜蛋白。

也就是说跨膜蛋白含量极低，且与膜结合紧密，属于非水溶性蛋白，很难溶于一般的裂解液中，通常得率极低，如果加入较强的裂解液成分又会破坏膜蛋白的活性，下游应用不易进行。

如何有效提取跨膜蛋白？

安利一款柱式法动物细胞/组织质膜及组分分离试剂盒（Invent Cat#SM-005），植物样品同款产品（Cat#SM-005-P），有如下优势：

• 无需大量样品，细胞样品 2*10^7 个，组织样品 20-30 mg 即可。
• 无需研磨仪及超高速离心机，无需自配溶液。
• 通过离心柱进行细胞破裂，不使用表面活性剂和 EDTA，对膜蛋白无影响，可应用于任意下游实验。
• 可同时获取细胞核，细胞浆，细胞器，细胞质膜四个组分，蛋白转运定位研究利器。
• 得到的膜片囊泡亚细胞结构，具有良好的形态，且具有活性，可完成更多下游应用。
• 可搭配选购不同溶解液，进行多方向下游应用（如 WB，IP，CO-IP，MS，酶活性检测等）。
• 操作时间仅需 1 小时即可完成。

还有百篇高分文献支持！

成功应用案例

案例 1：
文中使用 SM-005 进行小鼠心肌样品的质膜蛋白提取，结果显示质膜蛋白富集后对灌注后小鼠心脏样品中跨膜蛋白 SGLT1 检测效果的影响。与总膜部分相比，SGLT1 和质膜蛋白内参 Na+/K+ ATPase 信号在质膜蛋白组分中都有显著的增强。

doi:10.1371/journal.pone.0130605

案例 2：
肌腱病变研究中，TNMD 是一种 II 型跨膜糖蛋白，本文使用 SM-005 成功分离肌腱祖细胞的质膜蛋白，进行 western blot 分析，结果显示，静息细胞内 TNMD 蛋白质水平呈倍性变化。

DOI: 10.1089/ten.TEA.2019.0042

案例 3：
促卵泡激素受体（FSHR）在女性卵泡发育和雌二醇产生中起到重要作用，是一种 G-蛋白偶联受体（即七次跨膜受体）。与促卵泡激素（FSH）结合后激活许多细胞内信号通路。此文研究中发现了一种新的纯合子 FSHR 基因突变，使用 SM-005 分离转染后 HEK293T 细胞的质膜组分，WB 检测 FSHR 的表达情况，在 WT-FSHR 的细胞中检测到 87kd 处的成熟型 FSHR，但在转染模拟载体和 p.R59X 突变的细胞中没有检测到，证明了 p.R59X 突变导致了全长 FSHR 表达的丢失。

https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2017.09.010

小结：
Invent 柱式法质膜及组分分离试剂盒（SM-005）可高效富集高质量跨膜蛋白，大大降低了下游检测难度。除以上成功案例，还想了解更多详细信息可联系技术人员了解 Invent 膜蛋白提取工具