外泌体（Exosome）提取到底要选哪种方法？

关于外泌体

外泌体（Exosome）是细胞主动分泌的囊泡样小体，大小均一，直径30-200nm，密度1.10-1.18g/ml，来源广泛，几乎所有细胞都可分泌，在血液，尿液，唾液，脑脊液，腹水，乳汁等体液中广泛分布。

外泌体最早在1986年发现于培养的绵羊红细胞上清液中。1996年，研究者发现外泌体作为抗原呈递因子参与T细胞依赖的抗肿瘤反应，开启了外泌体蛋白研究的新天地。2013年诺贝尔生物/医学奖解答了细胞如何组织其内部最重要的运输系统之一——囊泡传输系统的奥秘。

外泌体是细胞间进行物质运输和信息交流的重要工具，可以通过调节免疫功能促进肿瘤的增殖，血管新生和肿瘤转移。与病毒感染，帮助病毒逃避免疫关系很大，并与心血管疾病，老年痴呆等疾病具有密切关系。

外泌体可通过流式、WB（检测指标有CD9,CD63,CD81）、电镜观察、NTA粒径追踪等手段检测，广泛应用于药物载体、疾病诊断marker、精准医疗、肿瘤治疗等方面研究。

由于外泌体直径小，样本含量低，提取十分困难。已有的外泌体分离方式有密度梯度离心、超滤离心法、免疫磁珠抗体捕获、商用试剂盒等。但到目前为止，仍没有一种提取方法能同时保证外泌体的含量、纯度以及生物活性。

外泌体分离常用方法

密度梯度离心法：在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，通过密度梯度离心，富集外泌体。此法获得的外泌体纯度较高，但步骤繁琐，耗时。

超滤离心法：利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离，比较粗糙的富集外泌体。

磁珠免疫法：外泌体表面有其特异性标记物（如 CD63、 CD9 蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，吸附外泌体。具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受 pH 和盐浓度影响，不利于下游实验，难以广泛普及。

商用试剂盒：市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，各有优缺。以下列举Invent公司生产的两款商用试剂盒，操作简单，利用沉淀法得率高，快速富集外泌体。

MinuteTM 外泌体沉淀试剂

（EI-027）

※适用样本类型：

血清，血浆，腹水，细胞培养基，尿液，脊髓液，细胞培养基

※特点：

使用非PEG配方聚集沉淀，无需超高速离心，无需自配溶液，适用于多类型样品，高效富集外泌体，成本低。

Minute TM 唾液外泌体分离试剂盒

（SE-030）

※样本类型：唾液

※特点：

唾液样品无需预处理,利用离心管柱技术，使用非PEG配方，无需超高速离心，小样品量：最低100ul即可快速获得外泌体。

（以下数据由上海华盈生物医药科技有限公司提供，特此鸣谢！）

唾液样品分别使用Invent EI-027和SE-030进行外泌体提取，并与其他方法进行比较。但因涉及其他公司商业机密，仅展示与Invent产品相关部分。（各项指标表明Invent外泌体提取试剂高效，比其他方法效果更好）

NTA检测情况

WB检测

质谱检测情况：检测到1037个蛋白

使用文献参考：

EI-027  外泌体沉淀试剂

1. Haihong Bai, Yiting Pan, Lu Qi, Long Liu, Xinyuan Zhao, Hangyan Dong, Xiaoqiang Cheng,Weijie Qin,., Xinghe Wang(2018)..Development a hydrazide-functionalized thermosensitive polymer based homogeneous system for highly

efficient N-glycoprotein/glycopeptide enrichment from human plasma exosome.Talanta 186 (2018) 513-520 https://doi.org/10.1016/j.talanta.2018.04.098.

2. fangyuan gao etal (2018).A novel strategy for facile serum exosome isolation based on specific interactions between phospholipid bilayers and TiO2.Chem. Sci., DOI: 10.1039/C8SC04197K.

3. Tan, Y., Nie, W., Chen, C., He, X., Xu, Y., Ma, X., ... & Wang, W. (2019). Mesenchymal stem cells alleviate hypoxia-

induced oxidative stress and enhance the pro-survival pathways in porcine islets. Experimental Biology and Medicine,1535370219844472.DOI: 10.1177/1535370219844472

SE-030 唾液外泌体分离试剂盒

1. Kyung-A Hyun , Hogyeong Gwak, Jaehun Lee, Bongseop Kwak , OrcID and Hyo-Il Jung(2018). Salivary Exosome and Cell-Free DNA for Cancer Detection.Micromachines 2018, 9(7), 340; doi.org/10.3390/mi9070340.

2. Jia, Y., Wang, C., Sun, H., & Ni, Z. (2019). Microfluidic Approaches Toward the Isolation and Detection of Exosome Nanovesicles. IEEE Access.DOI：10.1109/ACCESS.2019.2907123