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【实验技巧】蛋白酶抑制剂选择及添加---那些年你该学会的实验系列(八)

16630 人阅读发布时间:2025-03-03 15:48

【实验技巧】蛋白酶抑制剂选择及添加---那些年你该学会的实验系列(八)

英文特生物技术北京有限公司 2018-10-24

 
 

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Q

蛋白提取时要不要加蛋白酶抑制剂呢?

A

当细胞破碎的时候,蛋白水解酶就会被释放出来或被激活,如实验进程较长或样品需长期保存就会影响最终结果分析。为了避免这些情况的出现,建议在样品制备时添加蛋白酶抑制剂,可以有效地防止靶蛋白被内源性蛋白酶降解。

 

Q

蛋白酶抑制剂有哪些种类?

A

蛋白酶依据其活性中心,可以分为丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶、苏氨酸蛋白酶(罕见)。

 

常用的蛋白酶抑制剂有以下几种:
丝氨酸蛋白酶抑制剂: PMSF,AEBSF-HCl,Aprotinin,Chymostatin,亮肽素(Leupeptin)
 

天冬氨酸蛋白酶抑制剂:PMSF,碘@乙酸、抑肽素(Pepstatin),云芝发酵物

 

巯基蛋白酶抑制剂:PMSF,TLCK,TPCK,Antipain-HCl,N-乙基顺丁烯二酰亚胺

 

金属蛋白酶抑制剂(金属离子螯合剂):EDTA,EGTA,塔罗肽

 

苏氨酸蛋白酶抑制剂:目前缺乏资料

 

磷酸酶抑制剂:NaF,激活的原矾酸钠(激活方法将在试剂档案提及)、焦磷酸钠、β-甘油磷酸钠。

 

还有一些商品化的鸡尾酒系列(cocktail),它们一般包括大部份的蛋白酶抑制剂种类。
 

 

Q

蛋白酶抑制剂如何添加?

A

蛋白提取过程中,蛋白酶抑制剂需要在细胞裂解前加入,故通常需要添加到细胞裂解液中,添加的比例可按照蛋白酶抑制剂的倍数添加至1X,例如100X蛋白酶抑制剂,即1ml裂解液中添加10ul蛋白酶抑制剂即可。

 

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